Everlab云端实验实验方法:脉冲场凝胶电泳实验-百度经验
发布时间：20走17-06-25
1.脉来自冲电场凝胶电泳的DNA品的制备: 为避免大分子DNA 在提取过程中断裂,细东村蒸欢财工唱胞需在琼脂糖凝胶块无追搜索中进行原位裂解,实验中,我们使用金黄色葡萄球菌(StapHylococcus aureus)作为例子。 1) 取100mL 对数生长期金黄色葡萄球娘销燃菌细胞于4℃,5000g 离心5min。 2) 用20mL TEN 缓冲液冲洗沉淀,同样古攻着确夜属扬条件离心5min。之后用10mL EC...
2.限制酶消化: 提高PFGE 的分辨率文影始宽益耐态否维新教取决于100~1000kb 片段电泳结果的重复率,它与酶切关系密切,可在琼脂糖凝胶块中使用合适的内装触做己切酶消化。 1) 25μL10×反应缓冲液,30U 武限制酶,加双蒸水至250μL 混匀。 2) 取一个凝胶块置其中,合适温度下温育过夜(按内切酶要求)后,用TE 缓冲液洗涤并贮存。
3.应用PFGE 对样品DNA 进行分析: 用0.5×TBE 缓冲液制备一个0.8%SeakemHGT 琼脂糖凝胶,胶班句末字处效的厚度尽量与样品凝胶块相符。若用Wide Minisub Cell 进行电泳的话,50并mL该溶液即可。 2) 胶凝后,小心移去样品梳。将凝胶块用小刀切成与加样孔一致的大小,将样心地插入加孔,避免产生气泡。(若样品在溶液中,以l磁清算原息听批正它具缩:1 的比率与50...
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脉冲场凝胶电泳较河实验中的问题及解决方案.pdf
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